藥企業(yè)潔凈環(huán)境監(jiān)控的要點有二，環(huán)境微生物監(jiān)控和懸浮粒子監(jiān)控。目前，制藥企業(yè)潔凈區(qū)懸浮粒子監(jiān)測的標準有ISO?14644-1與國標GB/T?16292-2010，但它們都不是強制標準，那么在實際生產(chǎn)中到底應(yīng)該執(zhí)行哪個標準？尤其是ISO?14644-1在2015年修訂后，在最少取樣點、結(jié)果判定等方面有了不同規(guī)定，使得標準的適用問題更加突出，本文從標準的歷史沿革進行梳理，解決制藥企業(yè)在標準適用方面的疑惑，以更好地指導(dǎo)實踐工作。
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ISO14644-1標準簡介
國際標準化組織簡稱ISO，是由多個國家聯(lián)合成立的非政府性國際組織，是世界上最大的國際標準化機構(gòu)，目前有正式成員國120多個，中國也是成員國之一。ISO的宗旨是在世界范圍內(nèi)促進標準化工作及其有關(guān)活動的開展，以利于國際間的物資交流和相互服務(wù)，并且發(fā)展在科技界及經(jīng)濟活動方面的合作。ISO制定的標準僅是推薦給世界各國采用，是非強制性標準。但是由于ISO頒布的標準在世界上具有很強的權(quán)威性、指導(dǎo)性和通用性，對世界標準化進程起著十分重要的作用，所以各國都非常重視ISO標準。
ISO?14644的總標題是“潔凈室和相關(guān)受控環(huán)境”，其對潔凈室的定義為：塵埃粒子數(shù)量、濃度受控并被分級的房間，房間在建設(shè)和使用時需控制室內(nèi)污染物的引入、產(chǎn)生和滯留。ISO?14644適用于在產(chǎn)品或工藝完整性的保護方面均需要污染控制的行業(yè)，如航天、微電子、醫(yī)藥、醫(yī)療器械、保健品及食品行業(yè)。ISO?14644共由10個部分組成，其中ISO?14644-1是第一部分：根據(jù)粒子濃度對空氣潔凈度分級。ISO?14644-1采用統(tǒng)一的微粒濃度標準值衡量了不同工業(yè)領(lǐng)域的潔凈間。藥品生產(chǎn)中的潔凈室除要對環(huán)境中的塵粒進行控制外，還要對房間（區(qū)域）內(nèi)的微生物數(shù)量進行控制。我國《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（以下簡稱“GMP”）的“無菌藥品”附錄中對潔凈級別確認，其規(guī)定的懸浮粒子測試方法就參照了ISO?14644-1；另外，歐盟GMP、美國cGMP（動態(tài)藥品生產(chǎn)管理規(guī)范）等也都調(diào)用了ISO?14644-1標準。由此可見，ISO?14644-1雖是推薦性標準，但仍具有很高的權(quán)威性。
ISO?14644-1根據(jù)粒徑在0.1~5μm范圍的粒子濃度的不同，將潔凈室劃分為9級，現(xiàn)在我國制藥行業(yè)普遍采用4個級別的分法，分別對應(yīng)ISO的4.8、5、7、8級。ISO?14644-1中規(guī)定了潔凈級別確認時的取樣規(guī)則，包括最少取樣點、最小取樣量的確定。ISO?14644-1最初制定于1999年，經(jīng)過多年應(yīng)用后，根據(jù)ISO系統(tǒng)化回顧和用戶、專家的反饋，于2015年進行了修訂，最顯著的改變是對取樣點的選擇和數(shù)量采用了一個更加連續(xù)的統(tǒng)計方法：評估數(shù)據(jù)的收集。ISO?14644-1：2015附錄A“根據(jù)粒子濃度對空氣潔凈度進行分級的基準方法”中對取樣點的最小數(shù)量用表格進行了規(guī)定，不同面積對應(yīng)不同的最少取樣點，取消了原來的計算公式及95%置信區(qū)間的計算。
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GB/T 16292的歷史沿革
GB/T?16292-2010，即《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子的測試方法》，也對最少取樣點、最小取樣量進行了規(guī)定；其中對最少取樣點的確定提供了兩種方法，其中一種是引自ISO?14644-1：1999的公式法，即對潔凈室面積開根號，并對采樣點數(shù)小于9的潔凈室計算置信區(qū)間；另外一種是查表法，即根據(jù)不同的潔凈區(qū)面積和潔凈級別由表格給出對應(yīng)的不同的取樣點數(shù)目。追溯這一標準的歷史，GB/T?16292-2010的前一個版本是GB/T?16292-1996，而這一舊版本標準前言中明確說明了“本標準等效采用美國聯(lián)邦標準FS-209E-1992《潔凈室和潔凈區(qū)內(nèi)空氣浮游粒子等級》，并參考JGJ71-90《潔凈室施工及驗收規(guī)范》制定”，上文提到的這兩種標準中對最少采樣點數(shù)目的確定方法便是查表法。GB/T?16292-2010前言中明確說明“本標準參考了ISO?14644-1《潔凈間以及相關(guān)環(huán)境控制 第1部分：空氣潔凈度級別》和JGJ?71-90《潔凈室施工及驗收規(guī)范》而制定”，內(nèi)容中增加了確定最少取樣點數(shù)目的方法，也就是增加了ISO?14644-1：1999中的公式法。因此可以看出，GB/T?16292-2010中最少取樣點數(shù)目確定的依據(jù)來源有二，其一是ISO?14644-1，其二是美國聯(lián)邦標準FS-209E。按照標準引用的慣例，凡是不注日期的引用文件，都應(yīng)該適用其最新版本。ISO?14644-1：2015是國際標準ISO?14644-1的第二版，明確指出此第二版取消并代替了第一版ISO?14644-1：1999，這次技術(shù)修訂的改動是比較大的。從其對最少取樣點的確定原則可以看出，與第一版有很大的不同。因此，GB/T 16292-2010中最少采樣點數(shù)目確定規(guī)章中的第一個方法——依據(jù)ISO?14644-1：1999制定的公式法——應(yīng)該被新方法代替。
另外，我國1998版GMP對潔凈級別的劃分參照了美國聯(lián)邦標準FS-209E，分為100、10?000、100?000、300?000四級，自2010年修訂后改為與歐盟cGMP、世界衛(wèi)生組織GMP相同的A、B、C、D四級的分法。而GB/T?16292-2010是參照美國標準制定的，因此它在發(fā)布后不久便出現(xiàn)了適用問題。GB/T?16292-2010是2010年9月2日發(fā)布，2011年2月1日開始實施。GMP（2010年修訂）是2011年1月17日衛(wèi)生部令第79號公布,自2011年3月1日起施行。GB/T?16292-2010制定時我國2010版GMP還未公布，而新版GMP公布實施后，GB/T?16292-2010中的第二種方法查表法就已經(jīng)不適用于藥品生產(chǎn)企業(yè)了，不過我國的醫(yī)療器械行業(yè)對潔凈級別的劃分還是與美國標準相同，因此GB/T 16292-2010在醫(yī)療器械生產(chǎn)中仍適用。
到2021年為止，GB/T 16292-2010實施已有11年，卻未見修訂，不過2021年8月20日，國家市場監(jiān)督管理總局、中國國家標準化管理委員會發(fā)布了GB/T?25915.1-2021《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第1部分：按粒子濃度劃分空氣潔凈度等級》，代替GB/T?25915.1-2010 《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第1部分：空氣潔凈度等級》，并于2022年3月1日起開始實施，制藥企業(yè)可參考這一新標準。
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法規(guī)要求
《中華人民共和國標準化法》（以下簡稱《標準化法》）規(guī)定“標準包括國家標準、行業(yè)標準、地方標準和團體標準、企業(yè)標準。國家標準分為強制性標準、推薦性標準，行業(yè)標準、地方標準是推薦性標準”。GB/T?16292-2010是推薦性國家標準，是“國家鼓勵采用”的標準。《標準化法》還規(guī)定“國家積極推動參與國際標準化活動，開展標準化對外合作與交流，參與制定國際標準，結(jié)合國情采用國際標準，推進中國標準與國外標準之間的轉(zhuǎn)化運用”，ISO?14644-1也是我國眾多行業(yè)采用的國際標準之一，并被轉(zhuǎn)化運用為國內(nèi)標準，如前文提到的GB/T?16292-2010、GB/T?25915.1-2021。同時，我國的GMP是以局令形式發(fā)布的部門規(guī)章，關(guān)于空氣懸浮粒子的測定方法，在其無菌附錄中被描述為“測試方法可參照ISO?14644-1”。
標準制定都是建立在科學(xué)技術(shù)研究成果和社會實踐經(jīng)驗的基礎(chǔ)上的，科學(xué)技術(shù)總在不斷進步，因此標準也需要不斷完善提高，因此我們應(yīng)與時俱進，使用現(xiàn)行的標準。2016年9月24日，國家藥品審核查驗中心針對企業(yè)提出的ISO?14644-1:2015出臺后版本適用的問題，回復(fù)稱：企業(yè)在進行測試時應(yīng)使用現(xiàn)行的ISO標準進行測試，基于現(xiàn)行ISO標準進行變更控制，評估變更影響，制定并落實變更計劃。可見國際標準是值得參照執(zhí)行的合法有效標準。GB/T?16292-2010與ISO?14644-1:2015都不是強制性標準，但在企業(yè)沒有更優(yōu)的標準進行參照時，還是要選定一個來作為企業(yè)的執(zhí)行標準，對企業(yè)產(chǎn)生強制約束性。
采用不同標準時還需要把握一個原則：我國的GMP附錄是強制執(zhí)行的標準規(guī)范，遇到其他非強制標準與GMP附錄不一致的情況時，需執(zhí)行附錄規(guī)定。如對潔凈區(qū)的分級，我國GMP附錄中A級既要求靜態(tài)符合規(guī)定，又要求動態(tài)符合規(guī)定，既考慮0.5?μm粒徑的粒子又考慮5.0?μm粒徑的粒子，而ISO?14644-1:2015中對5.0?μm粒徑的粒子的規(guī)定與我國GMP附錄不一致，此時就必須執(zhí)行GMP附錄規(guī)定。
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潔凈級別確認與監(jiān)測
潔凈區(qū)懸浮粒子的監(jiān)測可以分為兩種情況：一種是潔凈區(qū)級別確認，通常是在潔凈區(qū)投入使用前對空調(diào)凈化系統(tǒng)進行驗證時，以及在使用一段時間后進行再驗證時需要確認；另一種是潔凈區(qū)的日常監(jiān)測。
歐盟GMP附錄1“無菌藥品的生產(chǎn)”中，將潔凈室和潔凈通風設(shè)備的級別確認與監(jiān)測分開進行描述，明確潔凈室和潔凈通風設(shè)備應(yīng)按ISO?14644-1劃分級別，級別的劃分應(yīng)明確區(qū)別于工藝的環(huán)境監(jiān)測。我國的GMP附錄1“無菌藥品”的第三章“潔凈度級別及監(jiān)測”的第九條講明了潔凈級別的劃分，第十條規(guī)定了潔凈區(qū)懸浮粒子的監(jiān)測，雖然我國GMP未將這兩者區(qū)分在不同章節(jié)，但也明確了日常監(jiān)測的采樣量可與進行潔凈度級別和空氣凈化系統(tǒng)確認時的空氣采樣量有所不同。而在國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品認證管理中心編寫的《藥品GMP指南》無菌藥品分冊中則明確指出：潔凈區(qū)的潔凈級別確認是設(shè)施驗證的一部分，并需要定期進行再確認；潔凈級別確認和潔凈區(qū)監(jiān)測是兩個環(huán)節(jié)，應(yīng)該明確予以區(qū)分并分別進行管理；潔凈級別的確認可以按照ISO?14644-1的有關(guān)要求實施；潔凈區(qū)（室）監(jiān)測中的取樣點和取樣量可以比進行潔凈級別確認時的取樣點和取樣量少，應(yīng)該通過正式的風險分析研究和對監(jiān)測結(jié)果的分析（至少要有6個月以上的運行數(shù)據(jù)作為分析基礎(chǔ)），來確定監(jiān)測頻次和限度；同時，監(jiān)測頻次和限度的確定也要考慮到生產(chǎn)工藝因素，對于監(jiān)測限度及取樣點應(yīng)該定期進行回顧驗證，以保證監(jiān)測行為的有效性。
涉及醫(yī)藥潔凈廠房監(jiān)測的標準還有2020年12月31日發(fā)布的T/ZAPA?0001-2020，即《醫(yī)藥潔凈廠房運行維護技術(shù)規(guī)范》。這一標準由鄭州市空氣凈化協(xié)會組織編寫，實施日期為2021年1月1日，屬于我國《標準化法》中規(guī)定的團體標準。其引用的文件包括GB/T?16292、GB/T?25915、ISO 14644-1等標準，該標準中規(guī)定“潔凈區(qū)內(nèi)的懸浮粒子的潔凈度、濃度限值的測試應(yīng)按ISO?14644-1標準規(guī)定；測試采樣點、位置次數(shù)、測試方法及所需用的測試儀器應(yīng)按GB/T?16292的規(guī)定”。
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結(jié)語
綜上所述，潔凈區(qū)級別確認時懸浮粒子的監(jiān)測需符合我國GMP“無菌藥品”附錄中的規(guī)定，附錄未規(guī)定的內(nèi)容則可參照ISO?14644-1:2015執(zhí)行。對于潔凈區(qū)日常監(jiān)測，制藥企業(yè)可根據(jù)生產(chǎn)線的設(shè)置情況，針對不同的潔凈級別，并結(jié)合產(chǎn)品生產(chǎn)風險控制要求，制定合理的取樣點數(shù)目及布置，具體可以參照ISO?14644-1:2015、GB/T?16292-2010的要求；同時，也可以參照執(zhí)行符合科學(xué)性、規(guī)范性的其他推薦性標準、行業(yè)標準、地方標準及團體標準。
